引言

尊龙凯时的靶向蛋白质降解策略作为一种新兴的治疗手段，旨在选择性地从细胞中清除特定蛋白质，以实现精准治疗。虽然最初的研究侧重于PROTAC分子，当前的靶向降解方法正在不断发展，其中之一便是创新的降解TAG（dTAG）技术。

dTAG技术是一种靶向验证的新方法，借助一种异双功能小分子，建立目标蛋白与E3泛素连接酶之间的三元复合物。dTAG的独特之处在于其通过CRISPR/Cas9技术将双功能降解剂结合位点引入目标蛋白中，使其成为理想的靶向验证工具，适用于研究剂量依赖效应。

本文采用双荧光素酶报告系统对dTAG蛋白降解进行分析，使用萤火虫荧光素酶作为基准标记物，确保其不受dTAG降解的影响。纳米荧光素酶（Nanoluciferase）则以非活性形式与目标蛋白融合。dTAG降解剂通过结合位序将目标蛋白与E3泛素连接酶结合，从而形成三元复合物，最终导致靶蛋白及其HiBiT片段的泛素化与降解。

为了测量纳米荧光素酶的荧光发射，在降解后加入LgBiT，使其与未降解的HiBiT片段结合形成活性纳米荧光素酶，发出荧光信号。纳米荧光素酶与萤火虫荧光素酶的发射比值可作为dTAG降解剂效能的指标，比例越低，目标降解程度越高。

研究目标

本研究旨在通过对dTAG结构的改进，提升已知dTAG支架的动力学性能。研究团队将不同浓度的dTAG降解剂和DMSO对照物分别置于1536孔iSTAR微孔板中。随后，将稳定转染有pSBTK-HiBiT-dTAG-TargetX-P2A-Fluc-T2A-Puro质粒的HEK293细胞单层分离，制成细胞悬液，经过离心处理后，重悬于含有2%胎牛血清的OPTIMEM培养基中，并向每孔加入细胞悬液。经过简短的离心后，在5% CO2，37°C的环境下孵育4小时。

每孔加入后的显色试剂OneGlo的处理后，监测萤火虫荧光素酶的发射。同样在每孔加入StopGlo试剂及纳米荧光素酶底物，并测量纳米荧光素酶的化学发光，进一步评估dTAG分解酶的能力。在实验中，测试多种dTAG降解剂诱导HiBiT靶向降解的效果，通过逐步增加的浓度进行分析。

重要观察

实验中，所有测试的dTAG降解剂均以浓度依赖的方式引起纳米荧光素酶发射的下降，表现出靶向降解的有效性。其中，dTAG-13诱导约50%的降解，而dTAG-v1则显示出最强的降解能力，几乎完全降解了HiBiT。在后续的实验中，评估了dTAG-v1降解剂的数据稳定性，与DMSO对照组进行比较，展现出良好的数据可靠性。

结论

使用尊龙凯时的dTAG蛋白质降解检测，验证了多种dTAG分子的有效性，成功诱导靶向HiBiT融合蛋白质的降解。利用PHERAstarFSX设备所具备的高灵敏度、快速读取时间以及与iSTAR板的兼容性，为生物医疗研究提供了卓越的实验工具，性能优于同类竞争者。